葡萄糖分子量-高糖dmem培养基

摘要

在中，髓系祖细胞分化为多种免疫细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和树突状细胞。这些先天免疫细胞在发育、宿主防御和适应性免疫的产生中发挥着关键作用。为了深入研究这些细胞的生物学特性，我们开发了一种简单快速的方法，用于从mouse中分离单核细胞，并在特定培养基中培养它们，最终分化为来源的巨噬细胞（图1）。

图形

技术方案亮点：

1. 直接离心取，无需反复冲洗，简化了操作步骤。

2. 单核与巨噬细胞的培养与分化过程详尽描述，确保了细胞的活力和分化效率。

实验概述：

背景

造血系统的髓系细胞，如单核细胞、巨噬细胞等，是机体免疫系统的重要组成部分。它们对感染或损伤作出快速反应，启动淋巴细胞和细胞因子产生，为适应性免疫提供桥梁。为了研究这些细胞的功能和分化机制，我们需要一种有效的方法来分离和培养髓系细胞。我们的protocol提供了这样一种方法，从中分离出单核细胞，并在特定条件下培养和分化为巨噬细胞。

材料和试剂

进行此实验所需的材料和试剂包括细胞刮板、尼龙无菌细胞过滤器、针、微量离心管、6孔板、移液器、DMEM高葡萄糖培养基等多种实验室常用物品和试剂。

设备

实验所需的设备包括台式离心机、微量离心机、水浴、层流罩、细胞培养箱、无菌剪刀和钳等。

实验步骤：

A. 提取（图2）

1. 按照机构批准的协议对小鼠进行安乐死。

2. 使用无菌镊子和剪刀分离股骨和胫骨。

3. 去除骨骼上的残留肌肉或。

4. 将分离的骨头浸泡在PBS中的6孔板里，放置在冰上，等待进一步处理。

5-18步：详细描述了如何获取并进行初步的洗涤和离心处理。

B. 单核细胞的分离和培养

1. 使用EasySep单核细胞分选试剂盒分选富集单核细胞。

2. 在特定培养基中培养分离的单核细胞，最多可达5天。

3. 在第5天，可以对单核细胞进行流式细胞仪分析，以鉴定其表面标志物的表达。

C. 分化为源性巨噬细胞（BMDM）

1. 在巨噬细胞培养基中添加M-CSF，为细胞的分化提供必要的生长因子。

2. 将总细胞或富集的单核细胞接种于培养皿中。

3. 在细胞培养箱中培养5天，期间定期更换培养基。

4. 在第5天，通过流式细胞仪评估巨噬细胞的分化效率，并收集静息期的巨噬细胞。

5-7步：描述了如何收集、计数和重悬细胞，以及如何通过流式细胞仪进一步富集静息期的巨噬细胞。

培养基配方

详细列出了巨噬细胞培养基的配方，包括DMEM高葡萄糖培养基、胎牛血清、GlutaMAX和青霉素/链霉素等成分。